1、營養鹽、緩沖劑、菌種溶液（浸泡24小時以上待用，低溫天氣浸泡48小時），三種溶液放置在培養箱中，蒸餾水20℃恒溫放置2小時。
2、稀釋接種液配置：取1000ml容量瓶1 支，加入 3ml 營養鹽溶液（取前搖勻），1ml 緩沖液，15ml 菌種溶液（取上清液），用蒸餾水定容至1000ml待用。（三種溶液所需蒸餾水均需20℃恒溫2h后配置）
3、標液配置：取 1000ml 容量瓶，先加入以上稀釋接種液 500ml 左右，將整瓶標物（用稀釋接種液蕩滌試劑瓶）加入容量瓶，搖勻，待完全溶解后用剩余稀釋接種液定容至 1000ml。
4、水樣配置：取1000ml水樣（用前放置溫度達到20℃）加入 3ml營養鹽溶液（取前搖勻），1ml 緩沖液，1-10ml菌種溶液：（取上清液），水樣中細菌含量較少時，視情況而定。
5、調節標液PH 值：將水樣倒入燒杯中，用滴管逐漸滴加氫氧化鈉溶液（5g 溶入 50ml 純水），用試紙條測試至 PH=7.2（6.7-7.5）
6、取 200ml 標液（實際樣品按預判濃度選擇對應的取樣體積）加入棕色培養瓶，并放入攪拌子，（此時不放藥劑杯 、敞口），放入培養箱 攪拌曝氣1 小時。
7、取出培養瓶，放入藥劑杯，在藥劑杯中加入3-4片（3-4勺）氫氧化鈉片狀（顆粒） （勿掉入待測液中），“設置測試參數”界面，設置測試終端水樣量（例如：200ml）、培養天數（5天）、恒溫延時改至2小時等參數后點擊開始測量，置入培養箱開始測定。
8、測試頭必須和培養瓶擰緊，無漏氣。
9、觀察前2天測試結果變化，前2-3天濃度會大幅度上升，后2天濃度趨于平穩。
10、當環境溫度與實驗溫度差距較大時，可以適當延長恒溫時間，以便水樣達到測定溫度。