在自然環境中汞會以各種形勢而存在，并且非常異變。例如環境中汞化合物會被微生物轉換成甲基汞。這種甲基與汞的有機化合物不易分解，會在生物體內累積。水中的甲基汞和乙基汞可以用液相色譜-原子熒光光譜法進行測定。
  其原理是用已活化的C18固相萃取柱對水中的甲基汞和乙基汞進行富集，用流動相將已富集的甲基汞和乙基汞洗脫至較小體積的溶液中。洗脫液通過液相色譜，將甲基汞和乙基汞依次分離，與氧化劑混合，在紫外光的照射下先后被氧化為無機汞，最后混合還原劑和鹽酸發生氫化反應，用原子熒光光譜儀進行測定。

檢測所需試劑

1. 實驗室一級純水
2. 乙酸鉉：分析純。
3. 氫氧化鈉：分析純。
4. L-半胱氨酸：生化試劑，純度≥99.0%。
5.二乙基二硫代氨基甲酸納:分析純。
6. 氫氧化鉀：分析純。
7. 鹽酸：分析純。
8. 過硫酸鉀：分析純。
9. 硼氫化鉀：分析純。
10. 甲基汞標準儲備液100ug/mL：市售以甲醇為溶劑的有證標準溶液，開封后于-20℃冷凍保存，避光、密封可保存12個月。
11. 乙基汞標準儲備液100ug/mL：市售以甲醇為溶劑的有證標準溶液，開封后于-20℃冷凍保存，避光、密封可保存12個月。
12. 甲醇溶液:用甲醇與實驗用水按照1:9的體積比進行混合，制得體積分數為10%的甲醇溶液。
13. DDTC溶液：稱取0.1g二乙基二硫代氨基甲酸納溶解于100g實驗用水中，制得質量分數為0.1%的DDTC改性溶液，用于固相萃取柱的活化。
14. 乙酸鉉60mmoL、半胱氨酸10mmoL、體積分數5%的甲醇混合溶液：量取體積分數為10%的甲醇溶液500mL,乙酸鉉4.62g,L-半胱氨酸1.21g,用實驗用水定容至1000mL,經溶劑過濾器過微孔濾膜抽濾，并超聲30min以上，用作液相色譜的流動相。
15. 鹽酸溶液：量取70mL濃鹽酸，溶于實驗用水并稀釋至1000mL,制得體積分數7%的鹽酸溶液，用作載流溶液。
16. 氫氧化鉀-硼氫化鉀溶液:
  稱取3.5g氫氧化鉀,0.2g硼氫化鉀，溶于實驗用水并稀釋至1000mL,制得氫氧化鉀、硼氫化鉀混合溶液，用作還原劑，當日配制使用。
17. 過硫酸鉀-氫氧化鉀溶液：
  稱取1.0g過硫酸鉀和3.5g氫氧化鉀，溶于實驗用水并稀釋至1000mL,制得過硫酸鉀、氫氧化鉀混合溶液，用作氧化劑，當日配制使用。
18. 甲基汞和乙基汞混合標準中間液：
  分別準確移取1.00mL的甲基汞和乙基汞標準儲備液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，得到1000.0ug/L的甲基汞和乙基汞混合標準中間液。
19. 甲基汞和乙基汞混合標準使用液1：
  準確移取5.00mL濃度為1000.0ug/L的甲基汞和乙基汞混合標準中間液于50mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，得到濃度為100.0ug/mL的甲基汞和乙基汞的混合標準中間液。再準確移取5.00mL上述濃度為100.0ug/mL的甲基汞和乙基汞混合的標準中間液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，得到濃度為5.0ug/mL甲基汞和乙基汞混合標準使用液。
20. 甲基汞和乙基汞混合標準使用液2：
  準確移取5.G0mL濃度為1000.0ug/mL的甲基汞和乙基汞混合標準中間液于100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，得到濃度為50.0ug/mL甲基汞和乙基汞合標準使用液。

檢測所需材料及設備

1. C18固相萃取柱。
2. 微孔濾膜:0.45um 水系/有機系混合濾膜。
3. 固相萃取裝置：手動、自動均可。
4. 液相色譜-原子熒光聯用儀。
5. 微量進樣針：100 uL。
6. 分析天平：感量0. 0001g。

水樣采集

  釆集水樣的體積不少于1500mL。釆集的水樣應置于聚乙烯容器中，用稀鹽酸調節pH值至3-7之間，密封保存。水樣如不能立即分析，需置于避光陰涼保存，保存時間不超過3d,若只測甲基汞，此條件下可保存7d。

檢測步驟

水樣的制備

  水樣的制備分為固相萃取柱活化、水樣富集和洗脫三個步驟。首先將C18固相萃取柱活化，分別用4mL的甲醇溶液和4mL的去離子水清洗，然后過4mL的DDTC改性液進行改性，過4mL的去離子水沖洗。將1000mL的水樣以5mL/min的流速通過C18的固相萃取柱，然后用4mL去離子水沖洗柱子，再用甲醇溶液清洗。取10mL的乙酸鉉、半胱氨酸、甲醇混合溶液以1mL/min的流速，對SPE小柱進行洗脫，收集洗脫液待測定。

儀器條件

  液相色譜條件：反向C18柱，150mmX4.6mm,5um；流動相為乙酸鉉、半胱氨酸、甲醇溶液的混合溶液；液相泵泵速：1mL/min；進樣體積：100uL。原子熒光光譜儀條件：燈電流30mA；負高壓270V。

標準曲線的繪制

  分別準確移取0.00mL、0.10mL、0.20mL、1.00mL、2.00mL濃度為5.0ug/L的混合標準使用液于5個10mL容量瓶中，用甲醇溶液稀釋至標線，搖勻，得到濃度為0.00ug/L、0.05ug/L、0.10ug/L、0.50ug/L、1.00ug/L的低濃度系列曲線。分別準確移取0.40mL、0.80mL、1.20mL、1.60mL、2.00mL濃度為50.0ug/L的混合標準使用液于5個lOmL容量瓶中，用甲醇溶液稀釋至標線，搖勻，得到濃度為2.00ug/L、4.00ug/L、6.00ug/L、8.00ug/L、10.00ug/L的高濃度系列曲線。

水樣檢測

  經過富集后的水樣按照設定好的儀器條件進行檢測，記錄保留時間和峰面積。空白實驗可以用一級純水按照水樣制備步驟進行操作。最終水樣的甲基汞和乙基汞的質量濃度可以按照相應公式計算得出。
  以上內容來源于《DB65/T 4367-2021 水質 甲基汞和乙基汞的測定 液相色譜-原子熒光光譜法》

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